1区带离心法
区带离心法是别离蛋白质的有用并且常用的办法。该法的第一步是在离心管中构成一个密度梯度(常用蔗糖梯度)，然后将待别离的蛋白质混合液放在密度梯度顶端。超速离心时，蛋白质即通过密度梯度移动，并依据其沉降系数而被分隔，最终各种蛋自质在离心管内被别离成各户独立的区带，能够在管底刺一小孔逐滴放出，分部搜集。
2 层析法
最常用的层析法是凝胶过滤和离子交流柱层析。 2.1 凝胶过滤(GFC)[10-12]
凝胶过滤也叫凝胶色谱和分子筛层析，是运用凝胶的网状构造依据分子的巨细和形状进行别离的办法。凝胶过滤是一种疾速而简洁的别离剖析技术，可用于蛋白质的脱盐、别离、提纯、剖析等等。柱中的填充料是水合程度高而不溶的碳水化合物高聚物，最常用的是葡聚糖凝胶〔其他有聚丙烯酞胺凝胶和琼脂糖凝胶等)。仙聚糖凝胶是具有不一样交联度的网状构造物，不一样类型的葡聚糖凝胶其“网眼”巨细不一样，能够用来别离纯化不一样分子巨细的物质。当蛋白质混合物通过层析柱时，比“网眼”大的蛋自质分子不能进入凝胶颗粒内部，不能沿着颗粒间隙活动，流程短，流速快，最先流出柱外;比“网眼”小的分子则进入凝胶颗粒内部，沿着孔道移动，从一个颗粒流出，又进入另一颗粒，所以下移速度慢，随后被洗脱下来。这样，不一样分子巨细的蛋白质因为流经间隔不一样而得到别离。依据欲别离蛋白质混合物的相对分子质量的上限和下限挑选合适的凝胶[13]。凝胶过滤因为上样量遭到柱床体积约束，常用在纯化道路的最终一步，此刻的样品蛋白溶液杂质量很低了，通过凝胶过滤就可纯化。当然，依据样品蛋白溶液的特征，也有把凝胶过滤放在提纯开始过程中的[14]。
而在在基因工程药物蛋白质的生产中,必需要采取一些合理的措施维护意图蛋白质的活性及稳定性,如在缓冲液中增加还原剂(如二硫苏糖醇)阻止巯基基团被氧化,增加蛋白酶抑制剂避免蛋白质的降解,增加金属鳌合剂(如EDTA)除掉重金属离子等,保持蛋白质的构造并保离子交流是指液相中的离子与固相(交流剂)上活性基团离子的可逆交流反响，运用此反响即将别离的混合物先在一定pH值的溶液中悉数解离，然后流过固相使之与固相上的离子进行交流，吸附于固相上。再依据混合物中各组分解离度的不一样，用不一样pH值的溶液别离洗脱下来。离子交流还能够与其他办法联系运用。例如HirokiTsukamoto等[24]运用凝血酶和离子交流色谱成功别离纯化了交融蛋白。
别离蛋自质常用的交流剂是纤维素离子交流剂。在纤维素上引进不一样的活性基团(分 酸性和碱性)，即变成不一样类型的离子交流剂，其间，酸性基团能解离出H+于溶液中的阳 离子交流，称为阳离子交流剂；碱性基团能解离出OH一与溶液中的阴离子交流，称为阴 离子交流剂。常用的阳离子交流剂是弱酸型能羧甲基纤维素(CM一纤维素)，阴离子交流 剂是弱碱型的二乙氨基乙基纤维素(DEAE一纤维素)。纤维素离子交流剂对蛋白质的交流容量大，分辨率高，能取得较好的别离作用及较高的回收率。此外，在与液相中的离子交流后，对离子的吸附力较弱，在较温文的条件下即可被洗脱下来，不影响蛋白质的活性。蛋白质混合物的别离可由改变溶液中盐类离子强度和pH来完成，对离子交流剂联系力最小的蛋白质首要被洗脱下来。离子交流层析的一个重要改善是:把离子交流和分子排阻两种效应联系起来，用于这种层析的材料有DEAE一葡聚糖。
持其活性[15、
16]。
2.2 离子交流柱层析[17、矿山泥浆处理设备
18]
离子交流色谱广泛地应用于别离各种生物大分子，且在实际工业纯化过程中包含一步或几步离子交流的过程[19]。传统的离子交流色谱通常选用多糖类凝胶作为基质，存在机械强度差、接受压力小等缺点，不能进行疾速淋洗，且别离时间长，易形成生物分子的变性、失活。无机硅胶[20]填料机械强度大、柱效高、孔径和颗粒巨细易于控制，但PH应用范围窄（2.0-8.0），在蛋白质别离过程中硅胶外表剩余的硅羟基对蛋白质发作不可逆吸附等缺点，然后致使蛋白质的质量回收率低，生物活性损失。硅胶涂敷固定相[21]在连续运用中涂层易
掉落、稳定性差。.聚合物基质[22、
23]固定相具有杰出的生物兼容性、化学稳定性及易于被衍生化的长处，在生物大分子别离中的位置越来越重要。它的亲水性减小了基质与蛋白之间发作非特异性相互作用的时机，也可在PH=1一12内广泛运用。
